冬虫夏草及其代用品有效成分比较研究
作者：吴洪臻 董新红 马德恩 颜春华 孟舒 姜泓 刘珂
单位：吴洪臻 董新红 马德恩(山东省临朐县中医院 262600)；颜春华(辽宁省丹东市药检所)；孟舒 姜泓 刘珂(辽宁中医学院)
关键词：
中草药000808 冬虫夏草Cordyceps sinensis (Berk. ) Sacc 为子囊菌门麦角菌科虫草属药用真菌，生产于西藏、青海、四川、云南等地。由于冬虫夏草的野生资源十分有限，人工培育这一研究课题引起了国内学者的关注，东北地区的学者培育出蚕蛹虫草及人工蛹虫草子实体并先后通过了国家科委组织的专家鉴定。由国家专利局1993年公布，经化学、药效、毒理等系列实验研究，结果表明，它们所含虫草素、甘露醇等成分均达到或超过名贵中药冬虫夏草，而且证明三者都具有滋补、强壮、抗疲劳、抗衰老、增强免疫力和性功能的作用，本文对虫草属的主要有效成分——核苷类成分进行比较研究，为虫草的质量考察提供科学依据。
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1 实验材料
1.1 冬虫夏草由山东中医学院提供并鉴定为Cordyceps sinensis；人工蛹虫草子实体由山东中医学院提供经鉴定为C.militaris of artificial sorophorc；蚕蛹虫草由辽宁丹东市药检所提供经鉴定为C. militaris of silkworm。
1.2 对照品：虫草素(Sigma公司)，腺苷及N6-甲基腺苷为辽宁省丹东市药检所提供，HPLC分析与薄层层析证明为单一成分。
2 薄层色谱鉴别
2.1 薄层板的制备：硅胶GF25410 g加0.1% CMC和0.1 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)溶液各15 mL调匀铺板7 块放置备用必要时烘干。
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2.2 供试液制备：分别取冬虫夏草、蚕蛹虫草、人工蛹虫草子实体粉末各3 g加20%乙醇溶液60 mL超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至10 mL，然后将滤液通过硅胶H干柱用90%乙醇溶液60 mL冲洗，收集洗脱液浓缩至干，残渣用50%乙醇溶液定容至5 mL作为供试品液，另取虫草素，腺苷，N6-甲基腺苷对照品用50%乙醇水溶液制成每1 mL含0.2 mg作为对照品液。点样量各8 μL。
2.3 薄层色谱：展开剂以氯仿-乙酸乙酯-异丙醇-浓氨水(8∶2∶6∶0.6)为展开剂(中国医学科学院药物研究所主编.中草药现代研究.北京：中国医学科学院中国协和医科大学联合出版社，1995：91)，展开至5 cm取出晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视结果见图1。
图1 冬虫夏草、蚕蛹虫草和人工蛹虫草子实体薄层色谱图
图1结果可见在绿色背景下有黑色斑点。人工蛹虫草子实体，蚕蛹虫草都含有虫草素，人工蛹虫草子实体的虫草素斑点深于蚕蛹虫草中虫草素的斑点，三者都含有腺苷，而N6-甲基腺苷仅在人工蛹虫草子实体中存在。
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3 高效液相色谱法鉴别
3.1 仪器与试剂
仪器：日本日立公司L-7000系列高效液相色谱仪，D-7500积分仪，CSF-1A超声波发生器(上海超声波仪器厂)。试剂：甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其它为分析纯。
3.2 方法与结果
3.2.1 液相色谱条件：色谱柱Nucleosil-100C18反相柱4.6 m×250 mm×5 μm，流动相甲醇-水(15∶85)临用前以微孔滤膜(0.45 μm)过滤并经超声波脱气处理，流速1 mL/min检测波长260 nm检测灵敏度0.1 AUFS柱温为室温。
3.2.2 样品分析：分别精密吸取用于薄层层析的供试品溶液1 mL置10 mL容量瓶中加50%乙醇水溶液稀释至刻度摇匀，溶液经微孔滤膜(0.45 μm)滤过作样品溶液。于上述色谱条件进样每次6 μL，样品色谱图见图2。
图2 人工蛹虫草、冬虫夏草和蚕蛹虫草的HPLC
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色谱图
通过HPLC色谱图可明显看出3 种药材不仅在虫草素、N6-甲基腺苷、腺苷等成分上有明显区别，而且人工蛹虫草子实体tR在28，30 min左右有一个色谱峰而冬虫夏草tR在9 min之后无峰。
4 讨论
4.1 由于冬虫夏草生态环境的构成十分复杂，产量少远远不能满足药用。培养虫草菌的无性型以进行其代用品的研究有其深远意义。
4.2 核苷类成分作为虫草属的主要有效成分是控制虫草质量的重要指标之一。由于核苷类成分极性较大且显碱性薄层层析时易产生拖尾，所以采用碱板并在展开剂中加入氨水以防止其解离。
(1999-03-29收稿), http://www.100md.com
单位：吴洪臻 董新红 马德恩(山东省临朐县中医院 262600)；颜春华(辽宁省丹东市药检所)；孟舒 姜泓 刘珂(辽宁中医学院)
关键词：
中草药000808 冬虫夏草Cordyceps sinensis (Berk. ) Sacc 为子囊菌门麦角菌科虫草属药用真菌，生产于西藏、青海、四川、云南等地。由于冬虫夏草的野生资源十分有限，人工培育这一研究课题引起了国内学者的关注，东北地区的学者培育出蚕蛹虫草及人工蛹虫草子实体并先后通过了国家科委组织的专家鉴定。由国家专利局1993年公布，经化学、药效、毒理等系列实验研究，结果表明，它们所含虫草素、甘露醇等成分均达到或超过名贵中药冬虫夏草，而且证明三者都具有滋补、强壮、抗疲劳、抗衰老、增强免疫力和性功能的作用，本文对虫草属的主要有效成分——核苷类成分进行比较研究，为虫草的质量考察提供科学依据。
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1 实验材料
1.1 冬虫夏草由山东中医学院提供并鉴定为Cordyceps sinensis；人工蛹虫草子实体由山东中医学院提供经鉴定为C.militaris of artificial sorophorc；蚕蛹虫草由辽宁丹东市药检所提供经鉴定为C. militaris of silkworm。
1.2 对照品：虫草素(Sigma公司)，腺苷及N6-甲基腺苷为辽宁省丹东市药检所提供，HPLC分析与薄层层析证明为单一成分。
2 薄层色谱鉴别
2.1 薄层板的制备：硅胶GF25410 g加0.1% CMC和0.1 mol/L磷酸氢二钠(Na2HPO4.12H2O)溶液各15 mL调匀铺板7 块放置备用必要时烘干。
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2.2 供试液制备：分别取冬虫夏草、蚕蛹虫草、人工蛹虫草子实体粉末各3 g加20%乙醇溶液60 mL超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至10 mL，然后将滤液通过硅胶H干柱用90%乙醇溶液60 mL冲洗，收集洗脱液浓缩至干，残渣用50%乙醇溶液定容至5 mL作为供试品液，另取虫草素，腺苷，N6-甲基腺苷对照品用50%乙醇水溶液制成每1 mL含0.2 mg作为对照品液。点样量各8 μL。
2.3 薄层色谱：展开剂以氯仿-乙酸乙酯-异丙醇-浓氨水(8∶2∶6∶0.6)为展开剂(中国医学科学院药物研究所主编.中草药现代研究.北京：中国医学科学院中国协和医科大学联合出版社，1995：91)，展开至5 cm取出晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视结果见图1。
图1 冬虫夏草、蚕蛹虫草和人工蛹虫草子实体薄层色谱图图1结果可见在绿色背景下有黑色斑点。人工蛹虫草子实体，蚕蛹虫草都含有虫草素，人工蛹虫草子实体的虫草素斑点深于蚕蛹虫草中虫草素的斑点，三者都含有腺苷，而N6-甲基腺苷仅在人工蛹虫草子实体中存在。
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3 高效液相色谱法鉴别
3.1 仪器与试剂
仪器：日本日立公司L-7000系列高效液相色谱仪，D-7500积分仪，CSF-1A超声波发生器(上海超声波仪器厂)。试剂：甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其它为分析纯。
3.2 方法与结果
3.2.1 液相色谱条件：色谱柱Nucleosil-100C18反相柱4.6 m×250 mm×5 μm，流动相甲醇-水(15∶85)临用前以微孔滤膜(0.45 μm)过滤并经超声波脱气处理，流速1 mL/min检测波长260 nm检测灵敏度0.1 AUFS柱温为室温。
3.2.2 样品分析：分别精密吸取用于薄层层析的供试品溶液1 mL置10 mL容量瓶中加50%乙醇水溶液稀释至刻度摇匀，溶液经微孔滤膜(0.45 μm)滤过作样品溶液。于上述色谱条件进样每次6 μL，样品色谱图见图2。
图2 人工蛹虫草、冬虫夏草和蚕蛹虫草的HPLC, http://www.100md.com
色谱图
通过HPLC色谱图可明显看出3 种药材不仅在虫草素、N6-甲基腺苷、腺苷等成分上有明显区别，而且人工蛹虫草子实体tR在28，30 min左右有一个色谱峰而冬虫夏草tR在9 min之后无峰。
4 讨论
4.1 由于冬虫夏草生态环境的构成十分复杂，产量少远远不能满足药用。培养虫草菌的无性型以进行其代用品的研究有其深远意义。
4.2 核苷类成分作为虫草属的主要有效成分是控制虫草质量的重要指标之一。由于核苷类成分极性较大且显碱性薄层层析时易产生拖尾，所以采用碱板并在展开剂中加入氨水以防止其解离。
(1999-03-29收稿), http://www.100md.com
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